測(cè)序技術(shù)，蛋白質(zhì)測(cè)序方法

來(lái)源：整理時(shí)間：2023-03-27 02:07:56 編輯：好學(xué)習(xí) 手機(jī)版

本文目錄一覽

1，蛋白質(zhì)測(cè)序方法
2，目前用于測(cè)序的技術(shù)主要有哪些
3，下一代測(cè)序技術(shù)有幾種
4，什么是DNA測(cè)序技術(shù)
5，DNA測(cè)序方法有哪些

1，蛋白質(zhì)測(cè)序方法

Sanger試劑用于鑒定蛋白質(zhì)和多肽的N－末端氨基酸殘基。Edman降解才是氨基酸序列的測(cè)定技術(shù)。但是它不能測(cè)超過(guò)40個(gè)殘基的序列。所以測(cè)大的蛋白質(zhì)的序列時(shí)，需要用化學(xué)試劑將蛋白質(zhì)降解為一些肽段。即需要水解。水解時(shí)一般用三氟乙酸進(jìn)行酸水解。酸水解就是加熱酸進(jìn)行水解，而堿水解就是加入堿進(jìn)行水解。蛋白質(zhì)一般用酸水解。而酯類(lèi)則兩種水解方式都常用。知道了嗎？^_^

蛋白質(zhì)測(cè)序方法

2，目前用于測(cè)序的技術(shù)主要有哪些

目前常用的測(cè)序技術(shù)有一代Sanger測(cè)序，二代常規(guī)的illumina測(cè)序，擎科生物推出的快速二代測(cè)序技術(shù)Fast NGS。三代的Pacbio和Nanopore測(cè)序。一代測(cè)序技術(shù)應(yīng)用1. PCR產(chǎn)物測(cè)序?qū)δ康幕虻腜CR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，獲取目的基因序列；2. 重測(cè)序如克隆產(chǎn)物驗(yàn)證、SNPs、突變、插入、缺失等；3. 分型分析菌分類(lèi)學(xué)鑒定、HLA分型、病毒分型等；4.臨床應(yīng)用腫瘤突變基因的檢測(cè)和腫瘤個(gè)體化治療，致病基因位點(diǎn)明確并且數(shù)量有限的單基因遺傳病檢測(cè)；5.對(duì)新一代測(cè)序技術(shù)的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。常規(guī)二代測(cè)序技術(shù)應(yīng)用1.基因組de novo測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、重測(cè)序、擴(kuò)增子測(cè)序、宏基因組測(cè)序、染色質(zhì)免疫共沉淀測(cè)序、DNA甲基化測(cè)序等。2.在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用主要包括癌癥基因組、遺傳病基因組、腫瘤與代謝疾病等。 Fast NGS應(yīng)用：1.抗體可變區(qū)測(cè)序；2.TA克隆測(cè)序；3.菌種鑒定；4.質(zhì)粒、病毒、線粒體、葉綠體等小基因組測(cè)序；5.基因編輯上可用于sgRNA文庫(kù)測(cè)序、靶基因鑒定、個(gè)體基因型檢測(cè)、基因編輯效率檢測(cè)。比常規(guī)二代測(cè)序更快速，更優(yōu)惠，對(duì)樣本要求更低。三代測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用：1.基因組組裝；2.全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序；3.甲基化測(cè)序等。

目前用于測(cè)序的技術(shù)主要有哪些

3，下一代測(cè)序技術(shù)有幾種

按原理分三種：Roche 454 焦磷酸測(cè)序，Iiiumina 是邊合成邊測(cè)序，ABI SOLID是連接測(cè)序

最近市面上出現(xiàn)了很多新一代測(cè)序儀產(chǎn)品,例如美國(guó)roche appliedscience公司的454基因組測(cè)序儀、美國(guó)illumina公司和英國(guó)solexatechnology公司合作開(kāi)發(fā)的illumina測(cè)序儀、美國(guó)appliedbiosystems公司的solid測(cè)序儀、dover/harvard公司的polonator測(cè)序儀以及美國(guó)helicos公司的heliscope單分子測(cè)序儀.所有這些新型測(cè)序儀都使用了一種新的測(cè)序策略——循環(huán)芯片測(cè)序法（cyclic-arraysequencing）,也可將其稱為“新一代測(cè)序技術(shù)或者第二代測(cè)序技術(shù)

下一代測(cè)序技術(shù)有幾種

4，什么是DNA測(cè)序技術(shù)

bac是細(xì)菌人工染色體意思，之所以有bac文庫(kù)的出現(xiàn)，是因?yàn)榛蚪M序列太長(zhǎng)，測(cè)序，以及篩選基因等沒(méi)有辦法完成，所以將基因組片段隨機(jī)打斷成片段，連到載體上構(gòu)建成一系列的重組子，這樣當(dāng)你需要特定的序列，只需要篩選出自己要的那個(gè)bac重組子就行了。說(shuō)的有點(diǎn)過(guò)于簡(jiǎn)單，不知道你能明白否？末端測(cè)序也是采用的雙脫氧終止法的。雙脫氧終止法的原理是；堿基之間是通過(guò)倆個(gè)堿基的5磷酸基團(tuán)和3羥基連接的，雙脫氧終止法就是利用了這個(gè)3羥基，將3羥基脫氧變成氫鍵，那么這樣下一個(gè)堿基的5磷酸基團(tuán)就沒(méi)有辦法連到前一個(gè)堿基上了。所以如果在做測(cè)序pcr的時(shí)候加一部分正常的dntp(3號(hào)位為羥基),加一定量的ddntp(2,3號(hào)位都是氫鍵)，那么在第一個(gè)堿基后如果接上去的是dntp,那么就可以接著連第三個(gè)堿基，如果連得是ddntp,那么就沒(méi)有辦法連下個(gè)堿基形成鏈終止，在測(cè)序pcr中，數(shù)以萬(wàn)計(jì)的反應(yīng)，那么就會(huì)出現(xiàn)2個(gè)堿基后終止的鏈，也有可能出現(xiàn)3個(gè)，4個(gè)，n個(gè)堿基后終止的鏈，這樣就形成了一系列從一個(gè)堿基到n個(gè)堿基的序列（其最后一個(gè)堿基都是三號(hào)位為氫鍵的，這個(gè)應(yīng)該理解吧）。那么如果我們?cè)谶B上去的ddntp上連上個(gè)熒光基團(tuán)(四種ddntp連上不同的熒光基團(tuán))，那么將這一系列長(zhǎng)度的鏈跑膠，會(huì)形成一系列的帶，通過(guò)每條帶最后一個(gè)堿基的熒光通過(guò)機(jī)器就能夠區(qū)分是什么堿基，將這些堿基拼接好后就是你要的序列了。

DNA測(cè)序技術(shù)，即測(cè)定DNA序列的技術(shù)。在分子生物學(xué)研究中，DNA的序列分析是進(jìn)一步研究和改造目的基因的基礎(chǔ)。目前用于測(cè)序的技術(shù)主要有Sanger等（1977）發(fā)明的雙脫氧鏈末端終止法和 Maxam和 Gilbert（1977）發(fā)明的化學(xué)降解法。這二種方法在原理上差異很大，但都是根據(jù)核苷酸在某一固定的點(diǎn)開(kāi)始，隨機(jī)在某一個(gè)特定的堿基處終止，產(chǎn)生 A，T，C，G四組不同長(zhǎng)度的一系列核苷酸，然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進(jìn)行檢測(cè)，從而獲得DNA序列。目前 Sanger測(cè)序法得到了廣泛的應(yīng)用。http://baike.baidu.com/link?url=S8neqboyOrwW895RyI0CjFWkb6Wt2g6Hjabexm7DcZS8SDM5BR0UQex9rxvJPDkqMVO-Dk9S-PMsU4supZ5xna

5，DNA測(cè)序方法有哪些

第1 代測(cè)序技術(shù)——熒光標(biāo)記的Sanger 法第一代就不說(shuō)了。第2 代測(cè)序技術(shù)——循環(huán)陣列合成測(cè)序法述第2 代測(cè)序技術(shù)中, 序列都是在熒光或者化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的協(xié)助下, 通過(guò)讀取DNA 聚合酶或DNA 連接酶將堿基連接到DNA 鏈上過(guò)程中釋放出的光學(xué)信號(hào)而間接確定的. 除了需要昂貴的光學(xué)監(jiān)測(cè)系統(tǒng), 還要記錄、存儲(chǔ)并分析大量的光學(xué)圖像.這都使儀器的復(fù)雜性和成本增加. 依賴生物化學(xué)反應(yīng)讀取堿基序列更增加了試劑、耗材的使用, 在目前測(cè)序成本中比例相當(dāng)大. 直接讀取序列信息, 不使用化學(xué)試劑, 對(duì)于進(jìn)一步降低測(cè)序成本是非?？扇〉?在一個(gè)正在發(fā)生突破瓶頸巨變的領(lǐng)域內(nèi), 很難準(zhǔn)確預(yù)測(cè)未來(lái)將發(fā)生什么.第3 代測(cè)序技術(shù)——直接測(cè)序?qū)⒒蚪MDNA 隨機(jī)切割成大約100 kb 左右的片段,制成單鏈并與六寡聚核苷酸探針雜交. 然后驅(qū)動(dòng)結(jié)合了探針的基因組文庫(kù)片段通過(guò)可尋址的納米孔陣列. 通過(guò)每個(gè)孔的離子電流均可獨(dú)立測(cè)量. 追蹤電流的變化確定探針雜交在每個(gè)基因組片段上的精確位置. 利用基因組片段上雜交探針的重疊區(qū)域?qū)⒒蚪M片段文庫(kù)排列起來(lái), 建立一組完整的基因組探針圖. 利用計(jì)算機(jī)算法, 獲得完整的基因組序列.

這位是搞分子生物學(xué)的嗎? dna測(cè)序的方法有很多種. 目前最常見(jiàn)的是雙脫氧終止法了. 在測(cè)序用的緩沖液中含有四種dntp及聚合酶. 測(cè)序時(shí)分成四個(gè)反應(yīng), 每個(gè)反應(yīng)除上述成分外分別加入2,3-雙脫氧的a, c, g, t核苷三磷酸(稱為ddatp, ddctp, ddgtp, ddttp), 然后進(jìn)行聚合反應(yīng). 在第一個(gè)反應(yīng)物中, ddatp會(huì)隨機(jī)地代替datp參加反應(yīng)一旦ddatp加入了新合成的dna鏈, 由于其3位的羥基變成了氫, 所以不能繼續(xù)延伸. 所以第一個(gè)反應(yīng)中所產(chǎn)生的dna鏈都是到a就終止了; 同理第二個(gè)反應(yīng)產(chǎn)生的都是以c結(jié)尾的; 第三個(gè)反應(yīng)的都以g結(jié)尾, 第四個(gè)反應(yīng)的都以t結(jié)尾, 電泳后就可以讀出序列了. 也許這樣說(shuō)你不一定明白. 舉一個(gè)例子, 假如有一個(gè)dna, 互補(bǔ)序列是gatccgat, 我們?cè)囍鲆幌? 在第一個(gè)反應(yīng)中由于含有dntp+ddatp, 所以遇到g, t, c三個(gè)堿基時(shí)沒(méi)什么問(wèn)題, 但遇到a時(shí), 摻入的可能是datp或ddatp, 比如已合成到g, 下一個(gè)如果參與反應(yīng)的是ddatp則終止, 產(chǎn)生一個(gè)僅有2個(gè)核苷酸的序列: ga, 否則繼續(xù)延伸, 可以產(chǎn)生序列g(shù)atccg, 又到了下一個(gè)a了. 同樣有兩種情況, 如果是ddatp摻入, 則產(chǎn)生的序列是gatccga, 延伸終止, 否則可以繼續(xù)延伸, 產(chǎn)生gatccgat. 所以在第一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生的都是以a結(jié)尾的片段: ga, gatccga, 同理在第二個(gè)反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以c結(jié)尾的片段: gatc, gatcc, 在第三個(gè)反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以g結(jié)尾的片段: g, gatccg 在第四個(gè)反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以t結(jié)尾的片段: gat, gatccgat, 電泳時(shí)按分子量大小排列, a反應(yīng)的片段長(zhǎng)度為2, 7; c反應(yīng)的為4, 5; g反應(yīng)的為1, 6; t反應(yīng)的為3, 8, 四個(gè)反應(yīng)的產(chǎn)物分別電泳, 結(jié)果為 8 7 6 5 4 3 2 1 a | | c | | g | | t | | 我們可以從右向左讀, 為gatccgat, 至此, 測(cè)序完成(上面這個(gè)圖在百度知道中顯示不正常, 因?yàn)榘俣戎赖木W(wǎng)頁(yè)用的是比例字體, 你如果想看它, 拷貝到記事本中, 用等寬的字體來(lái)看).

主要的是雙脫氧測(cè)序，是最經(jīng)典的現(xiàn)在測(cè)序方法已發(fā)展到第三代，可實(shí)現(xiàn)高通量測(cè)序