花藥預培養也是一種有效的方法:將滅菌后的花藥懸浮在只含甘露醇的溶液中,預培養25天,取出花藥然后分離花粉進行培養;或者在無菌條件下取出花藥在Nitsch等培養基中接種數天,然后分離花粉進行液體懸浮培養,開始小孢子發育,接種與培養花藥注意事項如下:①不要損傷花藥:如果花藥被損傷,很容易從損傷部位產生愈傷組織,各種植物花藥的最適培養時期不同,可根據花藥中花粉發育期與花蕾大小、外觀、顏色的相關性選擇材料。
-0/花粉培養中的預處理方法有暗處理、光質處理、高滲處理、藥物處理和溫度處理。溫度處理包括高低溫處理、接種前處理和接種后處理。常用的方法是取適當發育階段的花粉的花芽,放入冰箱(410攝氏度)冷藏115天。這種方法已經在曼陀羅、仙女木、柑橘等幾種植物中得到證實。有些是接種后經過一段時間的低溫或高溫處理,如蕪菁花粉培養,即游離花粉在35攝氏度培養過夜,再轉移到25攝氏度,獲得較高頻率的胚狀體誘導。花藥預培養也是一種有效的方法:將滅菌后的花藥懸浮在只含甘露醇的溶液中,預培養25天,取出花藥然后分離花粉進行培養;或者在無菌條件下取出花藥在Nitsch等培養基中接種數天,然后分離花粉進行液體懸浮培養,開始小孢子發育。材料的消毒類似于一般的組織培養,但培養過程類似于懸浮培養和原生質體培養,操作過程復雜,必須嚴格控制
用作花藥接種時花粉的基因型、生長和發育階段對花藥培養有直接影響,尤其是花粉的發育階段,是花藥培養成敗的關鍵。實驗表明花藥從減數分裂期到雙核期可能誘導體外孤雌發育。對大多數植物來說,最適宜的時期是中期到后期。各種植物花藥的最適培養時期不同,可根據花藥中花粉發育期與花蕾大小、外觀、顏色的相關性選擇材料。一般在花藥接種前,對花粉發育時期進行鑒定,以找出該植物小孢子發育的細胞學指標與花蕾發育的形態學指標之間的相關性,以便于接種和取材。芽的大小因品種、發育狀況、氣溫變化、灌溉與否而異,需要根據具體情況進行多重鑒定。確定花粉發育時期的主要方法是涂片法,用醋酸品紅或克百威或黃鉀鐵礬-蘇木精作染色液。
接種與培養花藥注意事項如下:①不要損傷花藥:如果花藥被損傷,很容易從損傷部位產生愈傷組織。②徹底去除花絲:花藥與花絲相連不利于愈傷組織或胚狀體的形成,需要徹底去除花絲。(3)幼苗形成后需要光照:幼苗形成后需要光照產生葉綠素,葉綠素由異養轉化為自養。花藥培養是利用植物組織培養技術,通過無菌操作技術,將已發育到一定階段的花藥接種到人工培養基中,從而改變花藥中花粉粒的發育程序,誘導其分化,繼續有絲分裂形成細胞團,進而形成未分化團。
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